菰黑粉菌遗传转化体系启动子的筛选

作者:卞加慧; 胡映莉; 汤近天; 夏文强; 叶子弘; 张雅芬
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目的:构建高效的野生稻遗传转化体系。方法:基于Alpine RNA SEQ的结果,筛选10个高强度启动子。以pUMa 932为基本载体,通过DNA无缝克隆技术将异源启动子和Potef替换为所选的启动子,构建相关载体。以菰黑粉菌UeT55为实验材料,基于PEG介导的原生质体转化构建表达菌株。用PCR-QRT软件测定不同条件下的荧光强度。结果:由Pmd、Pmix17、Pe、no和Pqcr8驱动的eGFP和基因表达量的荧光强度与对照Potef没有显著差异。由启动子、Pmia40、Psti1和Podc2驱动的eGFP和基因表达量的荧光强度显著低于对照组,而启动子、Phsp、Pef由Pcox12驱动的eGFP的基因表达分别是Potef驱动的9倍、5倍和2倍,荧光强度是Potef驱动的6倍,比对照组高4倍和1.5倍。结论:Phsp启动子表达能力最强,表达稳定。适合于茭白遗传转化体系的构建。