细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析
作者:史慧君; 董文丽; 郭妍婷; 袁圆圆; 陈俊贞; 杨莉; 冉多良; 付强
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目的是探索信号肽酶复合体亚基1号(SPCS1signal复合体亚单位1)在影响牛病毒性腹泻病毒(BVDV)复制中的作用。来自SPCS1基因的sgRNA使用Bench和CHOPCHOP的ling等平台设计,克隆到慢病毒载体lentiCRISPR v2,并与包装质粒pSPAX2和pMD2一起转染到人类胚胎肾细胞-HEK-293T。G.慢病毒被包装并感染MDBK细胞。经过5代嘌呤霉素筛选,获得敲除SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,Western blot检测到SPCS1蛋白的表达。荧光定量PCR和免疫荧光分析检测了5’非翻译区(untranslated region、UTR)的mRNA水平,以及在不同时间击倒BVDV感染SPCS1蛋白细胞后双链RNA(双链、dsRNA)的mRNA积累。倒置显微镜观察了BVDV(cytopathic effect、CPE)的细胞病变情况,病毒滴度的变化用reed-Muench法测量。结果:BVDV的mRNA和dsRNA水平显著低于Scramble对照组(P<0.01),CPE现象延迟和减弱,子代病毒滴度显著降低(P<0.01),最大降低23.7倍。SPCS1的击倒对BVDV的复制产生了重大影响,为BV建立DV新的防控技术提供了理论依据。