鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用
作者:王巧萍; 粟柯衡; 元正菊; 常志顺; 张薇; 张以芳; 信爱国
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为了建立检测鸭坦布苏病毒(UV,DTM)的荧光环介导等温扩增(RTLAMP)检测方法,根据UV,DTM的保守序列设计了一套特异性引物,并对反应时间和温度进行了优化,获得了特异性、敏感性和特异性,评估了该方法的重复性和临床适用性。结果表明,荧光RTLAMP的最佳反应条件为6525min。只有DTM的UV被特异性扩增,但其他几种鸟类病毒没有被扩增。最低检出限为410~2L,与QRT-PCR的灵敏度一致,是普通RT-PCR的100倍。批内和批间的重复性很高。该方法用于检测不同剂量DTM下UV人工感染的鸭肝样品。103.7TCID50组和102.7TCID50组的阳性检出率为100%,101.7TCID50组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的RTLAMP荧光检测方法特异性强,重复性好,灵敏度高,可作为DTMUV病的快速诊断方法之一。