西藏环状病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与应用

作者:杨振兴; 李占鸿; 李卓然; 李乐; 杨恒; 牛保生; 姚萍芬; 朱建波
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西藏环形病毒(TIBOVTibet orbivirus)是2009年在中国西藏新发现的环状病毒属病毒。本研究旨在在TIBOV建立视觉RTLAMP检测方法。根据中国从Seg-9基因分离的TIBOV(YNSZ/V290/2019)病毒保守序列,设计了两对特异性引物,并引入了一对环状引物。通过优化反应条件,建立了可视化检测方法。最佳反应条件为6450min。该方法用于检测虫媒病毒的核酸样本,如出血病病毒、蓝舌病病毒、中山病病毒、广西病毒、阿卡斑病毒、班纳病毒和芒市病毒。灵敏度试验表明,该方法的最低检出限为18.2拷贝/L,灵敏度是常规RT-PCR的10倍以上。采用RT-LAMP和RT-PCR方法检测了2596份蠓虫和蚊子样本的核酸。结果表明,两种方法在检出率、LAMP和检出率的阳性率分别为3.31%和1.19%,是RT-PCR的两倍以上。本研究建立的TIBOV视觉RTLAMP检测方法具有特异性强、灵敏度高、快速等优点,为TIBOV的现场快速检测和流行病学研究提供了有效的技术支持。