恒山黄芪毛状根遗传转化体系的建立及活性成分含量测定

作者:张弘弛; 刘瑞; 高志慧; 李慧; 杨阳
更新时间:

以恒山黄芪树叶为试材,研究了不同菌株诱导毛状根的能力,以及恒山黄芪毛状根的遗传转化系统,包括不同外植体、细菌溶液浓度、共培养时间、抗生素类型和浓度以及乙酰丁香酮浓度对毛状根诱导率的影响,为了建立一个稳定的恒山黄芪-毛状根体系,测定了大规模培养的毛状根中总黄酮和总皂苷的含量,为进一步建立恒山黄芪-毛状根液体培养体系积累活性成分提供参考依据。结果表明,用OD600=0.6的发根农杆菌LBA9402菌株侵染30片min的恒山黄芪叶片,用100mol·L-1乙酰丁香酮1/2MS培养基转移到中共培养3天。在含有500mg·L-1头孢克肟的筛选培养基上,对恒山黄芪叶的诱导能力最好,wal-Ma的诱导率为54.1%,发根农杆菌LBA9402的发根基因已整合到恒山黄芪叶的基因组中。经过液体培养和扩增后,总黄酮和总皂苷的含量显著增加,分别是天然根的1.72倍和2.31倍。