家蚕BmChd64基因的克隆与表达定位分析

作者:魏秋兰; 吴琼芳; 邓惠敏; 朱子丹
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Chd64是一种含有钙结合蛋白同源性(CH)结构域的蛋白质,在果蝇蜕皮激素和保幼激素信号通路中起重要作用。本研究以家蚕为研究对象。采用PCR方法克隆了与果蝇dmchd64同源的bmchd64基因。与表达载体pET-28a连接后,成功获得体外原核表达的bmchd64蛋白,并对其进行亚细胞定位分析。家蚕bmchd64基因的开放阅读框(ORF)序列为567  BP,编码188个氨基酸,预测分子量为20。9 -kDa,理论等电点为8.41,编码蛋白在第27~130个氨基酸处有ch结构域。同源性比较和进化分析表明,bmchd64与赤拟谷盗和黑腹果蝇的CHD密切相关。QRT PCR结果表明,bmchd64在5龄家蚕不同组织中均有表达,翼原基中的表达趋势与滴度20-羟基蜕皮酮(20E)的变化规律一致。亚细胞定位结果表明,bmchd64由均有在细胞核和细胞质中分布。细胞核内的荧光信号在细胞核周围强而弱。推测细胞质中的bmchd64也可能进入细胞核,最终定位于细胞核。结果表明,bmchd64主要通过20E信号通路调控翅原基的变态和发育,为进一步完善20E调控昆虫变态和发育的分子机制提供了实验依据。