目的建立一种高通量（96个样品/批）自动构建低初始血浆样品miRNA文库的方法，并验证该方法的可靠性和跨批一致性。基于PerkinElmer公司NEXTFLEX的方法？smallRNA SEQ kit和Sciclone？NGSx液体工作站，建立自动miRNA图书馆的构建方法。制备了三种类型的血浆参考物质（来自健康男性、健康女性和糖尿病患者）来模拟临床血浆样品，并使用自动建库方法进行了四批建库实验。从miRNA的检测类型、绝对定量、不同样品间的相对定量和差异表达分析等方面对方法性能和跨批次一致性进行了评价。结果miRNA检测物种的一致性：批次内和批次间（Jaccard、index）的平行比分别为0.61和0.62。miRNA表达水平的绝对定量一致性：批次内和批次间Pearson相关系数的平均值为0.96。不同批次间两个不同样品相对定量水平的相关系数平均值为0.74，在多个批次中可以检测到60%以上的差异表达miRNA。结论本研究建立了高通量血浆miRNA自动文库的构建方法，具有良好的批内性能和跨批一致性，可用于大队列血浆miRNA文库的构建实验。